Et fluorescensmikroskop er en type optisk mikroskop, der bruger en lyskilde med høj intensitet til at belyse prøven og excitere fluorokromer i prøven. Belysningen af prøven udføres normalt med en lyskilde, der udsender ultraviolet lys. De er meget udbredt inden for biologiske, medicinske og industrielle områder.
Hvordan fungerer et fluorescensmikroskop?
Et fluorescensmikroskop bruger en kviksølv- eller xenonlampe til at producere ultraviolet lys. Lyset kommer ind i mikroskopet og rammer et dikroisk spejl - et spejl, der reflekterer et område af bølgelængder og tillader et andet område at passere igennem. Det dikroiske spejl reflekterer det ultraviolette lys op til prøven. Nogle prøver fluorescerer naturligt under ultraviolet lys, fordi de indeholder fluorescerende stoffer såsom klorofyl. Hvis prøven, der skal ses, ikke fluorescerer naturligt, kan den farves med fluorescerende farvestoffer kaldet fluorokromer.
Hvad består et fluorescensmikroskop af?
1. Lyskilde
De mest almindelige lyskilder er kviksølv, xenon og LED'er. Kviksølv giver den bedste lyskvalitet til fluorescensmikroskop. LED'er bliver mere populære, fordi de er billigere end andre kilder, og de bruger mindre strøm.
| Mercury lampe | Xenon lampe | LED | |
| Bølgelængden af det udsendte lys | 350-370 nm | 400nm ~ 450nm | 400-700 nm |
| Levetid (time) | 200-300 | 400-600 | 10.000 |
| Fordel | 1. Højintensitetslys, de mest almindelige lyskilder. 2. Den udsender stærk ultraviolet og blåviolet for at excitere alle slags fluoroforer. 3. Lyse og farverige billeder. | 1. Den spektrale intensitet er stabil. 2. Stærk spektral intensitet i det infrarøde og mellem-infrarøde. | 1. Nem at udskifte. 2. Ingen grund til at varme op. 3. Kan tændes og slukkes med det samme. 4. Styr lyskildens intensitet. |
| Ulempe | 1. Et kort liv. 2. Lang opvarmningstid. | 1. Der kræves en speciel lavspændings jævnstrømsboks til overskydende varme. 2. Dyrere end kviksølvlampe | 1. UV-lys er svagere end kviksølvlampe. 2.Hver bølgelængde af lys kræver en separat LED på grund af de smalle båndbredder, de udsender. |
Mercury Fluorescerende Vedhæftning
LED fluorescerende tilbehør
2. Excitationsfilter
Excitationsfilteret er afgørende for driften af et fluorescensmikroskop. Det passerer lyset af en kortere bølgelængde, som det fluorescerende farvestof kunne absorbere. Det blokerer også de andre kilder til spændende lys.
Excitationsfilter (B,G,U,V)
3. Dichroisk spejl
Det dikroiske spejl er en type optisk filter, der reflekterer lys ved bestemte bølgelængder, mens det transmitterer andre. Det bruges i fluorescensmikroskoper til at adskille excitations- og emissionsbølgelængderne.
4. Emissionsfilter
Emissionsfilteret passerer kun de bølgelængder, der udsendes af fluoroforen og blokerer alt uønsket lys uden for dette bånd - især excitationsbølgelængderne.
5. Fluorescerende farvestoffer
Fluorescerende farvestoffer er organiske forbindelser, der besidder en egenskab af fluorescens, hvorved de kan danne et fluorescerende billede ved at udsende stærkt kontrast synligt grønt lys efter at være blevet ophidset af det stærkt oplysende ultraviolette lys. Almindeligt anvendte fluorescerende farvestoffer er; DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole), acridinorange, auramin-rhodamin, Alexa Fluors eller DyLight 488.
Hvor mange typer fluorescensmikroskoper?
1. Opretstående epifluorescensmikroskop:
Det er den mest almindelige type fluorescensmikroskop. Excitationen af fluoroforen og påvisning af fluorescensen sker gennem den samme lysvej (dvs. gennem objektivet). Størstedelen af fluorescensmikroskoper, især dem, der anvendes i biovidenskaberne, er af epifluorescensdesignet.
BS-2081F Research Fluorescerende Biologisk Mikroskop
2. Konfokalt fluorescensmikroskop:
Konfokalt fluorescensmikroskop: Denne type fluorescensmikroskop kombinerer laserscanning med fluorescerende belysning for at producere et billede. Det kan bruges i en lang række applikationer, såsom undersøgelse af celler og væv, påvisning af proteiner og andre stoffer i celler og måling af tykkelsen af materialer.
BS-2081F Research Fluorescerende Biologisk Mikroskop
3. Inverteret fluorescensmikroskop
Denne type mikroskops lyskilde og kondensator er placeret på toppen og vender nedad. Belysningsvinklen skal være 90 grader i forhold til overfladen af den prøve, der undersøges.
BS-2095F inverteret fluorescerende mikroskop
Hvad er fordelene og ulemperne ved fluorescensmikroskoper?
Fordele:
- Muliggør observation af celler i levende organismer uden at beskadige dem
- Giver billeder i høj opløsning med nøjagtige farver
- Giver mulighed for undersøgelse af levende processer i celler
- Bruges til at identificere forskellige typer molekyler inde i celler, såsom proteiner eller nukleinsyrer.
Ulemper:
-Det tillader kun observation af specifikke strukturer inde i en celle mærket med det fluorescerende farvestof.
- Fotoblegningen på grund af elektronexcitationen under fluorescensprocessen kan påvirke reaktive molekyler i de fluorescerende farvestoffer. Som et resultat heraf kan de reaktive farvestoffer miste deres kemiske egenskab af fluorescensemissionsintensitet.
-Cellerne er modtagelige for den fototoksiske effekt efter farvning med fluorescerende farvestoffer, da fluorofor-molekylerne absorberer højenergifotoner fra det kortbølgede lys.
Hvad er anvendelserne af et fluorescensmikroskop?
Fluorescensmikroskoper er meget udbredt inden for forskellige forsknings- og anvendelsesområder, herunder biokemi, cellebiologi, mikrobiologi, immunologi og medicin.
1. Inden for biologien muliggør fluorescensmikroskopet nøjagtig og detaljeret identifikation af cellulære og submikroskopiske cellulære komponenter og aktiviteter ved hjælp af fluorescerende farvemærkning.
2. På det medicinske område kan fluorescensmikroskopet bruge fluorescerende reagenser til at detektere tilstedeværelsen og distributionen af bakterier og vira eller til at hjælpe med at mærke kirurgiske mål for at lette operationen.
3. Inden for mineralogien bruges fluorescensmikroskopet ofte til at studere stoffer med spontane fluorescerende egenskaber, såsom asfalt, petroleum, kul, grafenoxid og andre mineraler.
4. I materialevidenskab kan fluorescensmikroskopet bruges i tekstilindustrien eller papirindustrien til at analysere fiberbaserede materialer.
Post tid: Mar-14-2023