Fluorescensmikroskopi har revolutioneret vores evne til at visualisere og studere biologiske prøver, hvilket giver os mulighed for at dykke ned i den indviklede verden af celler og molekyler. En nøglekomponent i fluorescensmikroskopi er lyskilden, der bruges til at excitere fluorescerende molekyler i prøven. Gennem årene er der blevet brugt forskellige lyskilder, hver med sine unikke egenskaber og fordele.
1. Kviksølvlampe
Højtrykskviksølvlampen, der spænder fra 50 til 200 watt, er konstrueret af kvartsglas og er sfærisk i form. Det indeholder en vis mængde kviksølv indeni. Når den fungerer, sker der en udladning mellem to elektroder, hvilket får kviksølv til at fordampe, og det indre tryk i kuglen stiger hurtigt. Denne proces tager typisk omkring 5 til 15 minutter.
Emissionen af højtrykskviksølvlampen er et resultat af opløsning og reduktion af kviksølvmolekyler under elektrodeafladningen, hvilket fører til emission af lysfotoner.
Den udsender stærkt ultraviolet og blåviolet lys, hvilket gør den velegnet til spændende forskellige fluorescerende materialer, hvorfor den er meget brugt i fluorescensmikroskopi.
2. Xenonlamper
En anden almindeligt anvendt hvid lyskilde i fluorescensmikroskopi er xenonlampen. Xenonlamper giver ligesom kviksølvlamper et bredt spektrum af bølgelængder fra ultraviolet til nær-infrarødt. Imidlertid adskiller de sig i deres excitationsspektre.
Kviksølvlamper koncentrerer deres emission i de nær-ultraviolette, blå og grønne områder, hvilket sikrer generering af lyse fluorescerende signaler, men kommer med stærk fototoksicitet. Derfor er HBO-lamper typisk forbeholdt faste prøver eller svag fluorescensbilleddannelse. I modsætning hertil har xenonlampekilder en glattere excitationsprofil, hvilket giver mulighed for intensitetssammenligninger ved forskellige bølgelængder. Denne egenskab er fordelagtig til applikationer som målinger af calciumionkoncentration. Xenon-lamper udviser også stærk excitation i det nær-infrarøde område, især omkring 800-1000 nm.
XBO-lamper har følgende fordele i forhold til HBO-lamper:
① Mere ensartet spektral intensitet
② Stærkere spektral intensitet i de infrarøde og melleminfrarøde områder
③ Større energioutput, hvilket gør det nemmere at nå objektivets blænde.
3. LED'er
I de seneste år er en ny konkurrent dukket op inden for lyskilder til fluorescensmikroskopi: LED'er. LED'er tilbyder fordelen ved hurtig tænd-sluk-skift på millisekunder, hvilket reducerer prøveeksponeringstider og forlænger levetiden for sarte prøver. Desuden udviser LED-lys hurtigt og præcist henfald, hvilket reducerer fototoksiciteten betydeligt under langsigtede levende celleeksperimenter.
Sammenlignet med hvide lyskilder udsender LED'er typisk inden for et snævrere excitationsspektrum. Imidlertid er flere LED-bånd tilgængelige, hvilket giver mulighed for alsidige flerfarvede fluorescensapplikationer, hvilket gør LED'er til et stadig mere populært valg i moderne fluorescensmikroskopi-opsætninger.
4. Lasere lyskilde
Laserlyskilder er meget monokromatiske og retningsbestemte, hvilket gør dem ideelle til højopløsningsmikroskopi, herunder superopløsningsteknikker såsom STED (Stimulated Emission Depletion) og PALM (Photoactivated Localization Microscopy). Laserlys vælges typisk til at matche den specifikke excitationsbølgelængde, der kræves for målfluoroforen, hvilket giver høj selektivitet og præcision i fluorescensexcitation.
Valget af en fluorescensmikroskop lyskilde afhænger af de specifikke eksperimentelle krav og prøvens karakteristika. Du er velkommen til at kontakte os, hvis du har brug for hjælp
Indlægstid: 13. september 2023